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一.百萤 胱天蛋白酶Caspase抑制剂Z-LETD-FMK参数

二.百萤 胱天蛋白酶Caspase抑制剂Z-LETD-FMK概述

Z-LETD-FMK是一种细胞渗透性不可逆的caspase蛋白酶8抑制剂，与caspase-8的催化位点结合，在诱导凋亡中起重要作用。Z-LETD-FMK与caspase-8的结合抑制了该蛋白酶的活性，使其能够抑制与caspase-8相关的凋亡事件。为了抑制细胞凋亡，应在诱导细胞凋亡的同时添加Z-LETD-FMK。FMK衍生的肽可作为有效的不可逆抑制剂，而不会增加细胞毒性作用。

图1.胱天蛋白酶Caspase抑制剂Z-LETD-FMK化学结构

三.百萤 胱天蛋白酶Caspase抑制剂Z-LETD-FMK实验方案

溶液配制

储备溶液配制

Z-LETD-FMK储备溶液配制：在Z-LETD-FMK中添加适量的DMSO，制成2-5 mM Z-LETD-FMK储备液。注意：将未使用的Z-LETD-FMK储备溶液分装在-20°C下。

 操作步骤

1. 根据需要处理样品以诱导凋亡。

2. 添加Z-LETD-FMK。
注意：我们建议使用终浓度为10-100 M的Z-LETD-FMK抑制胱天蛋白酶，例如对caspase-8抑制50 M。
注意：孵育的佳时间和浓度需要通过实验确定。

3. 根据需要对样品染色。

4. 用适当的仪器检测荧光强度。 

图示

图2.用caspase 8抑制剂Z-LETD-FMK抑制Jurkat细胞中caspase 8活性。当天，将Jurkat细胞以200,000个细胞/ 90 L /孔的密度接种在Costar黑色96孔板中。用1 M星形孢菌素处理细胞5小时。加入Z-LETD-FMK并与星形孢菌素共孵育。用Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒检测caspase-8活性。用Flexstation 3荧光酶标仪（Molecular Devices）在Ex / Em ＝ 540 / 620nm（截止＝ 610nm）下测量荧光强度。