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由于CO2培养箱受使用环境和条件的影响较大，许多厂家在产品设计上仍保留用户重新校准的部件，一般是在面板上设有校准和调零微调。无论哪种类型的产品，校准工作都应在箱内的温度和湿度稳定之后进行。
1、温度校准：
有的产品在出厂前已完成温度校准工作，校准部件均安装在箱内的控制板上，用户不宜再作调整。对于面板上有校准微调的产品，可在接近培养温度下(如37℃)，取一根精密温度计置于箱内，待温度稳定后观察温度计指示值，如与显示值不跗，调整微调使其相附即可。
温度的校准步骤：
①在培养箱内放置一个准确的玻璃管式水银温度计，以校准所设定温度。同时，再放置一个准确的体温计，以校准极限温度。
②把温度旋钮调到所需温度37℃。
③把极限温度旋钮调到最大。等待24小时，让机器达到稳定。
④如果温度还没达到37℃，再调整温度旋钮到37℃，然后再等待24小时，让机器最后达到稳定。
⑤当培养箱稳定在37℃后，按逆时针方向转动极限温度旋钮，直到该极限温度旋钮的指示灯明亮为止。
⑥再小心地把极限温度旋钮顺时针方向转动，直到指示灯刚好熄灭为止。
注意:机器正常运转期间，其极限温度指示灯应保持熄灭状态。