小肠固有层单细胞悬液制备流程

肠道黏膜是身体重要的免疫屏障，由相关的淋巴组织和免疫细胞构成。肠道黏膜异常被认为与多种疾病密切相关，如炎症性肠病、IgA 病等。

科学家从未停止对肠道黏膜免疫屏障的探索。肠道固有层分布着丰富的免疫细胞，他们在维持肠道免疫稳态方面十分重要，制备相应的单细胞悬液，对肠道固有层细胞进行研究，对探索肠道疾病的发病机制、疾病治疗的作用靶点以及药品起效的作用机制具有重要意义。

单细胞悬液制备步骤：

1、小肠样品制备

采用颈椎脱位法处理小鼠后固定于手术台，于腹部喷洒 75% 乙醇消毒，对皮肤和肌肉层进行中线切口，暴露肠道，并从盲肠端开始截取 10 cm 小肠， 隔医用消毒布放置于冰上，小心地用眼科消毒剪和镊子去除小肠肠系膜和脂肪组织，并去除派氏结。纵向剖开小肠，PBS 缓冲液冲洗肠道内容物直至干净。

2、试剂配制

根据后续实验选着配套的消化酶试剂盒，流式分析，原代培养等可选用温和酶消化试剂盒。

3、小肠固有层单细胞悬液制备

每个样品准备好对应的消化酶和终止液，常温解冻。在平皿中用 PBS 缓冲液清洗肠段并用眼科消毒剪剪成小块( 约5 mm长) 。将小肠小块收集在含有消化酶的消化管中。

将消化管放入单细胞胞悬液制备仪上，选择对应的肠道程序，程序结束后，仪器自动停止，然后加入终止液，离心，弃掉上清，用培养基重悬即可得到小肠固有层单细胞悬液。（如下图）

采用仪器进行，可批量制备单细胞悬液，节约了实验时间，仪器上有人体和小鼠各个组织、器官对应的程序，提高了单细胞悬液制备的活率和得率，使后续实验进行更加顺利。