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引言

胰蛋白酶由于其能够特异性酶解精氨酸和赖氨酸羧基端，是基于质谱技术的蛋白质组学领域应用广泛的蛋白酶。

胰蛋白酶切割胰岛素原生成胰岛素，在胰岛素的生产中发挥着重要作用，但由于胰蛋白酶对赖氨酸和精氨酸的切割选择性差别不大，会在切割反应中产生副产物以猪源胰蛋白酶基因为模板，扩增胰蛋白酶原(TgM)基因，将其转化大肠杆菌，构建含TgM基因的工程菌株并诱导表达，菌液经高压均质机破碎，收集破碎后菌液，经提纯后得到胰蛋白酶原液，用于后续酶活测定等试验。

本研究中，菌体破碎使用的是高压均质机，可将工程菌株破碎率提升，后得到较高浓度的蛋白溶液。

实验步骤：

准备高压均质机GSL-5（定制17ml处理量带在线排气）1台、标配款冷水机1台。

收集大肠杆菌样品进行仪器上机前处理.

清洗仪器，倒入处理后的大肠杆菌样品；压力调大800-1000bar处理3-4遍。

压力归零，收集均质后的样品。

实验前后对比图：

均质前 均质后

用紫外分光光度法检测酶活力，并将终纯化获得的突变胰蛋白酶用于后续与胰岛素原相关实验。

注意事项：

1、注意GSL-15带在线排气处理量，控制好样本进样量。

2、大肠杆菌在均质时排空会有较多气泡属于正常情况。