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根据我国生物安全防护要求，通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物或其毒素检测要求适用于“生物安全防护三级实验室，业内简称P3实验室”。
核酸检测在实际操作中，实验员必须“一个一个地开盖加样和核酸提取”。P3实验室是检测人员与病毒零距离接触的地方，实验室需要完全密封，房间内处于空气负压状态，人流、物流、气流单向流动，确保在里面的污染物不会泄漏到外面而造成污染。
检验一般分为以下五个步骤:
1、采集检测样本，如咽拭子或肛拭子。检测样本通过带互锁装置及紫外线杀毒功能的传递窗进入到P3实验室，可有效避免传递样本时污染物的流通，不污染实验室外环境。
2、样本在水浴箱经半小时56摄氏高温灭活，使病毒蛋白丧失生理活性，不再具备感染、发病和繁育的能力。
3、在标本采集处理间，实验员取得灭活后的样本时，首先进行震荡，接着开盖加样。样本在开盖转移的过程中，病毒很容易曝露在实验室的空气中，与实验员基本上是零距离接触。
4、人工核酸提取流程繁杂，虽可以使用仪器辅助，但由于比对的需要，往往要加以人工操作，这需要反复进行离心、加试剂、洗涤等10多个步骤。
5、提取的核酸送至核酸检测室内，就需要上仪器设备了。把提取的核酸加入到扩增试剂中，通过荧光PCR仪进行RT PCR反应，将提取的核酸逆转录成DNA,再以DNA为模版，对特定位点进行扩增，利用不同的温度进行变性、退火和延伸，对每个循环采集荧光值，45个循环后绘制荧光曲线，用时约110分钟，实验员根据荧光曲线分析判断结果的阴性和阳性。
任何一个阶段出现问题都将会造成“假阴性”或“假阳性”。在检验全过程中，对于异常样版，实验员采用不一样的实验试剂开展核查明确。次之，每开展一批实验，均会任意插进三个以上空白对照，对于阳型样本会开展病毒基因的测序核对，以避免“假阳性”的出現。检验后，按时随机抽取检验后的样本送第三方实验室开展检验，对数据信息开展数据分析，另外也参加相关部门]的室间质评，确保检验的精确性。
以上就是PCR实验室核酸检测的步骤。更多实验室相关资讯敬请关注我们。
