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AAT Bioquest Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光 货号11301

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200Tests起订

产品规格

可售数量: 200Tests

西安百萤生物科技有限公司

9年

经营年限

陕西西安

所在地区

9.5

综合评分

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产品属性

Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光

货号                       11301                            存储条件                   f/l                             
规格200 Tests

Ex (nm)570Em (nm)583
分子量
溶剂



产品优势  

1.操作便捷:支持96孔或384孔微孔板检测模式,无需分离步骤即可轻松实现自动化操作;

2.双信号检测:采用Amplite® Red底物,既可通过荧光酶标仪(激发/发射波长:571/585 nm)也可通过吸光度酶标仪进行检测;

3.超高灵敏度:在100 µL反应体系中可检测低至0.1 mU/ml的MPO活性;

4.高通量适配:特别适合用于MPO抑制剂的高通量筛选研究。

 

适用范围

用于检测 MPO活性。

 

产品介绍

髓过氧化物酶(MPO)是一种主要存在于中性粒细胞和单核细胞中的绿色血红素蛋白,具有过氧化物酶活性。它能催化过氧化氢与卤素离子反应,生成具有细胞毒性的酸类及其他中间产物,在机体氧依赖性杀伤肿瘤细胞和微生物过程中起重要作用。MPO缺乏症是一种遗传性酶缺陷疾病,可导致免疫功能低下。目前,治疗性MPO抑制剂的研发备受关注。

Amplite®髓过氧化物酶检测试剂盒提供了一种快速、灵敏的MPO检测方案,适用于溶液和细胞裂解液样本。该试剂盒支持96孔或384

孔微孔板检测,无需分离步骤即可实现自动化操作;采用Amplite® Red底物,可通过荧光酶标仪(Ex/Em=571/585 nm)或吸光度酶标仪进行双模式检测。在100μL反应体系中, 低可检测0.1 mU/ml的MPO活性,非常适合用于MPO抑制剂的高通量筛选。

注:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!




产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.MPO标准品或测试样品(50μL)
2.添加MPO工作溶液(50μL)
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度(截止570 nm)


溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液(250X):
将40μLDMSO(组分E)加入到Amplite Red底物(组分A)的小瓶中。应立即使用原液。注意:在硫醇如二硫苏糖醇(DTT)存在下,Amplite Red底物不稳定。反应中DTT的浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH(> 8.5)下也不稳定。因此,反应应在pH7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液,pH7.4。

1.2 H2O2储备溶液(500X,10 mM):
将10μL的3%H2O2(0.88M,组分C)加入870μL的测定缓冲液(组分B)中。注意:稀释的H2O2溶液不稳定。应丢弃未使用的部分。

1.3 髓过氧化物酶(MPO)标准溶液(200 mU / mL):
将50μL测定缓冲液(组分B)加入到髓过氧化物酶标准品(组分D)的小瓶中。注意:一个小瓶含有约5 - 10 mU的髓过氧化物酶。

2. HRP库存解决方案(50X):
将1mL测定缓冲液(组分B)加入到辣根过氧化物酶(组分C)的小瓶中。

3.葡萄糖氧化酶标准溶液(100 U / mL):
将1mL测定缓冲液加入葡萄糖氧化酶小瓶(组分D)中。

4.葡萄糖原液(10X):
将5mL测定缓冲液加入葡萄糖小瓶(组分F)中。


2.标准溶液

MPO标准
将20μL200mU / mL MPO标准溶液加入380μL测定缓冲液(组分B)中,得到10 mU / mL MPO标准溶液(MPO7)。 取10 mU / mL MPO标准溶液进行1:3连续稀释,得到剩余的系列稀释MPO标准品(MPO6 - MPO1)。


3.工作溶液

将20μLDelterite 红色储备液(250X)和10μLH2O2(500X)加入5mL测定缓冲液(组分B)中,使总体积为5.03mL MPO工作溶液。 避光。


样品分析

表1. 96孔固体黑色微孔板中MPO标准品和测试样品的布局。 MPO =髓过氧化物酶标准品(MPO1-MPO7,0.01至10mU / mL); BL =空白对照; TS =测试样品。

BLBLTSTS
MPO1MPO1......
MPO2MPO2......
MPO3MPO3

MPO4MPO4

MPO5MPO5

MPO6MPO6

MPO7MPO7

表2.每个孔的试剂组成。 注意,由于Amplite Red底物(非荧光产物)的过度氧化,高浓度的MPO可能导致荧光信号降低。

容积试剂
MPO1-MPO750ul连续稀释(0.01至10 mU / mL)
BL50ul分析缓冲液(组分B)
TS50ul测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备髓过氧化物酶标准品(MPO),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向髓过氧化物酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLMPO工作溶液,使总MPO测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLMPO工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟,避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm,发射= 590-600nm(Ex / Em = 540 / 590nm,截止= 570nm)监测荧光强度。 注意:也可以将板的内容物转移到白色透明底板上,并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比,吸收检测具有更低的灵敏度。


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级别 超纯、高纯
含量 95%
产品规格 200 Tests
品牌 AAT Bioquest
用途范围 AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 顺丰包邮 免费技术咨询

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