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产品介绍
膜联蛋白是一类钙离子依赖性磷脂膜结合蛋白家族。作为细胞凋亡研究的重要工具，膜联蛋白V能够特异性检测细胞表面暴露的磷脂酰丝氨酸（PS）——这一特征不仅存在于细胞凋亡过程，也可见于其他形式的细胞死亡。
细胞活性检测可通过多种参数实现，其中膜联蛋白V-荧光染料偶联物通过监测磷脂酰丝氨酸（PS）外翻现象，被广泛应用于细胞凋亡研究。在凋亡过程中，PS会从细胞膜内侧翻转至外侧，这种细胞表面PS的出现是凋亡早期/中期的普遍标志，其可检测性甚至早于细胞形态学变化的发生。
Annexin V-mFluor Blue 570可被488 nm蓝激光有效激发，并在~570 nm波长处发射强橙色荧光，其荧光发射强度显著优于488 nm激发条件下的膜联蛋白V-Cy3偶联物。
实验方案
操作步骤摘要
1.制备含测试化合物的细胞样本（200 µL/样本）
2.加入膜联蛋白V偶联物检测溶液
3.室温避光孵育30-60分钟
4.使用流式细胞仪进行分析
储存与处理条件
荧光标记膜联蛋白V偶联物储存于含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS缓冲液(pH 7.4)中。为保持稳定性，建议-20℃避光保存，避免反复冻融（可能影响蛋白完整性）。在推荐条件下可稳定保存至少6个月。
标准实验方案
膜联蛋白V偶联物细胞孵育步骤
1.配制膜联蛋白V结合缓冲液：10 mM HEPES，140 mM NaCl，2.5 mM CaCl₂，pH 7.4
2.用测试化合物处理细胞诱导凋亡（如：Jurkat细胞用星形孢菌素处理4-6小时）
3.离心收集细胞（1-5×10⁵细胞/管）
4.用200 μL膜联蛋白V结合缓冲液重悬细胞
5.加入2 μL膜联蛋白V偶联物
（可选）加入死细胞染料如碘化丙啶（货号17585）标记坏死细胞
6.室温避光孵育30-60分钟
7.在用流式细胞仪分析细胞之前，加入300μLAnnexin V缀合测定缓冲液（来自步骤1）以增加体积
8.使用流式细胞仪检测荧光强度
流式细胞仪检测
使用匹配滤光片的流式细胞仪定量膜联蛋白V结合情况
注：贴壁细胞因收获过程可能损伤膜结构，常规不建议用于流式检测。但Casiola-Rosen等已建立相关实验方法。
注：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床及其他非科研用途！
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18502920169
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029-68064558
AAT Bioquest Annexin V-mFluor 570蓝色标记 货号20085
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