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新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性*
产品参数
Ex (nm) | 493 | Em (nm) | 515 |
分子量 | 1090.90 | 溶剂 | DMSO |
存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
简要概述
新型钙离子荧光探针Cal-520 AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针,Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630提供强大的均匀荧光测定工具,用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂(如Fluo-3 AM,Fluo-4 AM和Rhod-2 AM)相比,这些钙敏感染料明显更亮,并提供更高的信噪比,大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内,Cal520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割,产生带负电荷的荧光Calbryte 染料,留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时,该受体表示细胞内钙的释放,这显着增加了Calbryte 520,Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM, Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的强大指标。
除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外,Calbryte 520,Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中,不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外,Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为钙指示剂,可与绿色荧光蛋白(GFP)细胞系进行多色检测。 此外,Calbryte 520,Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化,可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发,并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化,可在555 nm激发,并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化,可在594 nm激发,并与TexasRed®滤光片组配合使用。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的钙离子荧光探针。
产品说明书
使用Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯类
1.操作步骤
Calbryte AM酯应在使用前在无水DMSO中重新配制。 DMSO储备溶液可以在-20℃下储存(干燥)并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定三个月。 以下是我们推荐的将Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯加入活细胞的方案。 该方案仅提供指南,实际应根据您的特定需求进行修改。
a)在无水DMSO中制备2至5mM Calbryte 520AM,Calbryte 590AM或Calbryte 630AM酯的储备溶液。
b)将Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。 在Hanks和Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(0.04%Pluronic®F-127)中制备10至20μM的染料工作溶液。 细胞加载所需指示剂的确切浓度必须根据经验确定。
注意:非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Calbryte 520 AM,Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM酯的水溶性。 各种Pluronic®F-127可从百萤购买。
c)如果您的细胞(如CHO细胞)含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒(1-2 mM)添加到染料工作溶液中(终浓度为0.5-1 mM)
注意:各种ReadiUse 丙磺舒(包括水溶性钠盐和稳定溶液)均可从百萤购买。
d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)加入细胞板中。
e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟,然后将板在室温下再孵育15分钟。
f)用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂(如1 mM丙磺舒)的缓冲液替换染料工作溶液,以去除多余的探针。
g)对于Calbryte 520 AM,在Ex / Em = 490 / 525nm处进行钙测试,对于Calbryte 590 AM,使用540/590nm进行钙测试,对于Calbryte 630 AM,使用610/640nm进行钙测试。
2.测量细胞内钙响应:
图1. CHO-K1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。 将CHO-K1细胞以每孔100μL每孔40,000个细胞接种过夜,在96孔黑色壁/透明底板中。将含有丙磺舒的HHBS中的100μLFluo-4AM或Calbryte 520AM加入孔中,并将细胞在37℃下孵育45分钟。 用200μLHHBS替换染料加载培养基,加入50μL50μMATP,并使用FITC通道用荧光显微镜(Keyence)成像。
产品应用文献
An evolutionary-conserved VPS34-PIKfyve-TRPML1-Myosin II axis regulates the speed of amoeboid cell migration
Authors: Dehio, Philippe and Michard, C{\'e}line and Yam-Puc, Juan Carlos and Mart{\'\i} i L{\'\i}ndez, Adri{\`a}-Arnau and Fabre, Lucien and Schaefer, Thorsten and Wymann, Matthias P and Okkenhaug, Klaus and Soldati, Thierry and Mehling, Matthias and others,
Journal: bioRxiv (2024): 2024--01
Authors: Maltsev, Anna V and Barlas, Yasir and Hazan, Adina T and Zhang, Rui and Goldhaber, Joshua I
Journal: Biophysical Journal (2024): 457a
Universal Biomaterial-on-Chip: a versatile platform for evaluating cellular responses on diverse biomaterial substrates
Authors: Atif, Abdul Raouf and Aramesh, Morteza and Carter, Sarah-Sophia and Tenje, Maria and Mestres, Gemma
Journal: Journal of Materials Science: Materials in Medicine (2024): 2
Biphasic calcium phosphate recruits Tregs to promote bone regeneration
Authors: Li, Jiaojiao and Zhao, Qin and Wang, Can and Fu, Liangliang and Zhao, Zifan and Tang, Ziqiao and Yin, Chenghu and Wang, Min and Xia, Haibin and others,
Journal: Acta Biomaterialia (2024)
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18502920169
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029-68064558
AAT Bioquest 新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM 货号20651
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