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钙离子荧光探针Indo-1, AM
简要概述
钙离子荧光探针Indo-1, AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，在许多生物学研究中钙离子的测定非常重要。在与钙离子结合的条件下，荧光探针显现出光谱响应，这使研究者可以通过利用荧光 、流式细胞仪、荧光分光镜和荧光分光仪等来研究细胞内部游离的Ca2+浓度的变化。在众多易受UV（紫外光）激发的钙离子指示剂中，Fura-2和Indo-1是 常使用的。当Indo-1 按比率发射时，Fura-2能按比例激发。Fura-2在按比例成像显微检测法中使用，在这里改变激发波长与改变发射光波长更有实用性。在与Ca2+结合的条件下，通过扫描300~400nm 的激发光谱发现Fura-2光吸收发生改变，当时监测到发射光在510 nm处。相对地，Indo-1在流式细胞术中作为染料使用，在这里用单一的激光器激发更有实际意义（通常使用光谱线位移在351?64 nm的氩离子激光器）。Indo-1的发射光从无游离Ca2+环境下的480nm转移到400 nm处（当与Ca2+）。Indo-1 AM是Indo-1的一种具有细胞渗透性的形式。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。
产品说明书
操作说明
1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Indo-1，AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *储备液。
2.1Indo-1，AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *使用量：1 mg
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Indo-1，AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *与495.09μL无水DMSO混合。
3.使用10μMIndo-1，AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 * 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2mM Probenecid。
3.1 终孔内浓度为Indo-1，AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *：5μM
3.2Pluronic®F-127的 终井内浓度：0.04％
3.3 终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μLIndo-1，AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *，25.6μL10％Pluronic®F-127，和256μL25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议 终浓度为Indo-1，AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度 终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的 终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的 终浓度调节至以下：5μMIndo-1，AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *，0.04％Pluronic®F-127,1mM丙磺舒。
5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 346/475 nm运行实验。
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