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Cell Meter 活细胞Caspase 9结合检测试剂盒 绿色荧光
产品订购：QQ:1485814040
简要概述
我们的Cell Meter 活细胞胱天蛋白酶活性测定试剂盒基于胱天蛋白酶的荧光FMK抑制剂。 这些抑制剂是细胞可渗透的和无细胞毒性的。 一旦进入细胞，胱天蛋白酶抑制剂就与活性胱天蛋白酶共价结合。 此Cell Meter 活细胞caspase 9活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 9活化来检测细胞凋亡。 它用于定量凋亡细胞中活化的caspase 9活性，或用于筛选caspase 9抑制剂。 FAM-LEHD-FMK，绿色标记试剂，可通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的caspase 9。 该试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方案。
产品说明书
分离细胞的检测方案
概述
用密度为5×105到2×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞
将FAM-YVAD-FMK以1：150的比例加入到细胞溶液中
在室温下孵育1小时
将细胞沉淀，用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞
在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞
注：使用前将所有部件在室温下解冻。
操作方法
1.根据您的特异性诱导方案，将细胞培养至于细胞凋亡诱导的密度，但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子：
1）用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。
2）用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。
3）用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。
4）用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。
注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的细胞密度。
2.通过向FAM-YVAD-FMK（组分A）的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。
3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液（来自步骤1）以1：150的比例添加到细胞溶液中，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育1小时。
注1：对于FAM-YVAD-FMK标记，细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。
注2：对于粘附细胞，用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。
注3：适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。
4.将细胞以约200g旋转5分钟，并用1mL洗涤缓冲液（组分B）洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。
注1：FAM-YVAD-FMK是荧光的，因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。
注2：对于分离的细胞，应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样，用于步骤6。
5.如果需要，用DNA染色标记细胞（如用于死细胞的碘化丙锭，或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst）。
6.通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度（对于碘化丙锭，Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料，Ex / Em = 350 / 461纳米）。
6.1对于流式细胞仪，使用FL1通道监测荧光强度（FL2通道用于碘化丙锭染色）。
6.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。
注意：如果需要平衡细胞浓度，调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失，则此调整步骤是可选的。
6.3使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞（用于碘化丙啶染色的TRITC通道，用于Hoechst染色的DAPI通道）。
6.4使用荧光酶标仪，使用Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm处截止）底部读取模式监测荧光强度。
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